사용 중새로운 트린더의 시약 TODB, 높은 배경은 탐지 결과에 영향을 미치는 일반적인 문제이며, 밀봉 및 불완전한 플레이트 세척은 작동 중에 쉽게 간과되는 주요 요인입니다. 이 두 가지 문제는 비특이적 결합 및 잔류 물질로부터의 간섭으로 인해 색상 배경이 비정상적으로 증가 할 수 있습니다. 아래는 자세한 분석 및 솔루션입니다.
부적절한 폐쇄 : 비특이적 조합 뒤의 '무대 뒤에서'구동력
차단 단계의 기능은 반응 담장의 표면에서 비 결합 부위 (예 : 효소-연결 면역 흡착성 분석 플레이트)를 차단하는 것이다. 밀봉이 충분하지 않은 경우, TODB 시약의 기질, 효소 컨쥬 게이트 및 기타 성분은 캐리어의 표면에 무작위로 흡착되어 표적 물질의 참여없이 색상 신호를 형성하여 배경 값을 직접 증가시킵니다.
특정한 이유
1. 밀봉 시간 불충분 : 일반적으로 말하면, 밀봉은 60 분 동안 37 ℃ 또는 실온에 120 분 동안 배치해야합니다. 시간이 30 분 미만으로 단축되면, 캐리어 표면의 활성 부위는 차단 용액 (예 : BSA, 탈지 분유)에 의해 완전히 덮을 수 없으며 차단되지 않은 소수성 영역은 TODB 반응 시스템에서 단백질 성분을 활성으로 흡수하여 배경 색상을 초래할 것입니다.
2. 너무 낮은 농도의 차단 용액 : 원래의 5% BSA가 1%로 떨어질 때와 같이 차단 용액의 효과적인 성분이 충분하지 않은 경우, 분자 사이에 단단한 보호 필름이 형성 될 수 없습니다. TODB 시약에서 양 고추 냉이 퍼 옥시 다제와 같은 성분은 소수성 상호 작용을 통해 플레이트 기공의 내부 벽에 고착 될 것이며, 반응 동안 기질과 비특이적 반응이 발생할 것이다.
3. 밀봉 용액의 실패 : 밀봉 용액이 반복적으로 동결되고 녹거나 만료 날짜보다 더 많이 저장되면 내부의 단백질 성분은 밀봉 기능을 저하시키고 밀봉 기능을 잃어 버터의 표면에 많은 "노출 된"부위가 발생하여 배경 신호의 원천이됩니다.
불완전한 보드 세척 : 잔류 물질의 "스태킹 효과"
플레이트 세척의 주요 기능은 결합되지 않은 자유 시약 (예 : 비 결합 항체, TODB 전구체 물질)을 제거하는 것입니다. 플레이트 세척이 철저하지 않으면 잔류 물질은 후속 반응에서 색상 발달에 계속 참여하여 배경 간섭이 축적 될 수 있습니다.
특정한 이유
1. 플레이트 세척이 너무 적습니다 : 기존 테스트는 플레이트를 3-5 회 세척해야합니다. 그것이 2 배 미만으로 감소되면, 웰의 잔류 자유 효소 복합체는 완전히 제거 될 수 없으며, 반응은 TODB 기판과 반응하여 추가적인 색상 개발을 초래할 것이다.
2. 너무 많은 세제 잔류 물 : 보드를 세척 한 후, 흡수 용지에 구멍이 반전되지 않고 건조하지 않으면 각 구멍에 더 많은 세제 잔류 물이 있으며 내부의 일부 구성 요소는 TODB 반응 시스템의 균형을 방해합니다. 동시에, 잔류 효소 컨쥬 게이트는 액체와 인접한 구멍으로 확산되어 교차 오염을 일으키고 배경을 높일 것이다.
3. 세탁기에는 문제가 있습니다. 세탁기의 바늘이 차단되거나 압력이 충분하지 않으면 플레이트 구멍의 모서리가 세척 할 수없는 영역이됩니다. 잔류 TODB 시약은 건조 후 결정화되고 다시 용해 될 때 반응에 참여하여 국소 배경색이 어두워집니다.
요약 : 운영 세부 사항 배경 제어의 효과를 결정합니다
밀봉 및 세척판은 일상적인 단계이지만, 품질은 TODB 시약의 배경 수준에 직접적인 영향을 미칩니다. 실질적으로, 밀봉 용액의 농도를 점검하고 세탁기를 정기적으로 교정하는 것과 같은 측정 값과 결합하여 "밀봉 시간을 연장+플레이트 세척 수를 늘리는 방법"을 채택하는 것이 좋습니다. 이는 배경 값을 크게 줄이고 탐지 결과의 정확성에 대한 보증을 제공 할 수 있습니다.
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