HEPES는 4-hydroxyethylpiperazine-ethanesulfonic 산 (N'-a-hydroxythylpiperazine-N'-ethanesulfanic 산), 백색 수정같은 분말, 일정한 PH 범위를 오랫동안 통제할 수 있는 수소 이온 완충기입니다. 효과적인 완충 범위는 pH6.8-8.2입니다. 통용되는 단백질 적출 세포의 용해 완충기, 세포 배양 완충기, 등을 준비하기 위하여.
HEPES의 분리 불변의 것은 7.5입니다. 같은몰때의 HEPES와 그것의 Na HEPES의 섞는 것은, 해결책의 PH 7.5입니다. 일반적으로, HEPES의 조정 어금니 농도는 첫째로 준비되고, 그 때 PH는 강한 기초 (일반적으로 통용되는 NaOH)를 가진 지정된 가치에 맞춥니다. 여기에서, NaOH는 단지 OH를 제공하는 것을 봉사합니다. KOH와 같은 다른 강한 기초를 이용하는 것도 가능합니다. PH 다름이 크 때, 집중한 NaOH를 이용하십시오. 미조정을 위해, 묽게 한 NaOH를 이용하십시오. NaOH 고체가 직접 추가되는 경우에, 과실은 너무 크, NaOH가 녹는 발열의 때 온도를 바꾸는 것은 PH 전극의 정확도에 영향을 미칠지도 모릅니다.
HEPES 세포의 용해 완충기 준비:
| 세포의 용해 해결책 A: | 세포의 용해 해결책 B: | ||
| HEPES | 10mmol/L, pH7.9 | HEPES | 20mmol/L, pH7.9 |
| KCl | 10mmol/L | NaCl | 420mmol/L |
| MgCl2 | 1.5mmol/L | MgCl2 | 1.5mmol/L |
| DTT | 1mmol/L | DTT | 0.5mmol/L |
| 甘油 | 5% | 글리세린 | 25% |
| EDTA | 0.2mmol/L | EDTA | 0.2mmol/L |
| NP-40 | 1% | ||
| PMSF (사용의 앞에 추가하십시오) | 1mmol/L | PMSF (사용 후를 추가하십시오) | 0.5mmol/L |
| aprotinin | 3mg/L | aprotinin | 5mg/L |
| leupeptin | 3mg/L | leupeptin | 5mg/L |
| pepstainA | 2mg/L | pepstainA | 3mg/L |
단계:
1. EP 관 및 분리기 (4000r/min, 5min, 4개도)로 세포를 모으십시오.
2. , 상청액을 버리십시오 위와 같이 PBS를 가진 3 시간을 세척하고십시오, 원심 작용을 받게 하십시오.
3. 완충기 A의 100 μl를 추가하고, 10 분을 위한 얼음에 알을 품고, (14000 r/min, 1 분) 원심 작용을 받게 하고, 상청액을 버리십시오.
4. 완충기 B의 60 microliters에 있는 펠릿을 Resuspend, 30min를 위한 얼음에 분리기, 분리기 (14000r/min, 15min, 0개도) 잘 섞고, 상청액을 모으고 펠릿을 버리십시오.
그(것)들의 사이에서, lysate A의 역할은 주로 세포질 단백질 및 막 단백질을 풀어 놓기 위하여 이용됩니다, lysate B는 핵 단백질을 풀어 놓기 위하여 이용됩니다, NP-40는 계면활성제 및 세제 둘 다입니다, 그것의 역할은 (온화한) 세포막을이고, 풀어 놓인 단백질에 파괴하고 둘 다 세포질 단백질의 강수를, 이렇게 가장 막기 위하여 결합할 수 있습니다 상청액이 첫걸음에 있는 원심 분리에 의해 제거된 후에 막 단백질은 제거될 수 있습니다. 핵 단백질은 추출된 후에, 2h를 위한 lysate A로 투석되고 IP를 위해 결합될 수 있습니다; 또는 다른 해결책으로 묽게 하고 IP 다른 실험을 위한 집중된 분리기 관으로 교환해.
Desheng의 생체외 진단 시약의 주요 원료는: 1. Bis 완충기 Tris, BICINE, HEPES의 모자, MOPS, 꼭지, EPPS, MOPSO의 관, PEP; 2. Chemiluminescent 시약 luminol, isoluminol, 아크리딘 에스테르 DMAE-NHS의 아크리딘 에스테르 NSP-DMAE-NHS의 아크리딘 소금 NSP-SA의 아크리딘 소금 NSP-SA-NHS의 아크리딘 하이드라지드 NSP-SA-ADH의 아크리딘 에스테르 ME-DMAE-NHS; 3. 새로운 Trinder의 시약 TOOS의 정상, 법석, ADPS의 높은 산, DAOS, HDAOS, MADB, MAOS; 4. 혈액 수집 관 첨가물을 위한 반대로 방사선 조사 별거 젤, 나트륨 헤파린, 리튬 헤파린, EDTA-2K3K, EDTA-2NA는, 더하여 응고제, 응고 분말, 등을 승진시킵니다, 또한 바이러스 수송 매체와 carbomer 940/980를 일으킵니다. 사기 위하여 올 것이다 환영받은 친구.
