HEPES 버퍼4-하이드록시에틸피페라진-에탄소울폰산 (N?? -a-하이드록시에틸피페라진-N?? -에탄소울판산), 흰색 결정 분말, 수소 이온 버퍼로 오랫동안 일정한 pH 범위를 조절할 수 있습니다..효과적 버퍼 범위는 pH 6.8-8.2일반적으로 단백질 추출 리시스 버퍼, 세포 배양 버퍼 등을 준비하는 데 사용됩니다.
HEPES의 분리 상수는 7입니다.5HEPES 와 그 Na-HEPES 를 적정형으로 혼합 할 때 용액의 pH 는 7 입니다.5일반적으로 HEPES의 고정 모라 농도는 먼저 준비되고, 그 다음 pH는 강한 염기 (일반적으로 일반적으로 사용되는 NaOH) 로 지정된 값에 조정됩니다.NaOH는 OH을 공급하는데만 사용됩니다.. 또한 KOH와 같은 다른 강한 염기를 사용할 수 있습니다. pH 차이가 큰 경우 농축 NaOH을 사용하십시오. 정밀 조정을위한 희석 NaOH을 사용하십시오. NaOH 고체가 직접 첨가되면, NaOH의 염기 염기 염기 염기 염기 염기 염기 염기 염기 염기 염기 염기 염기 염기 염기 염기 염기오류가 너무 크네요, 그리고 NaOH가 용해되었을 때 열과 온도의 변화는 pH 전극의 정확성에 영향을 줄 수 있습니다.
HEPES 리시스 버퍼제:
| 리시스 용액 A: | 리시스 용액 B: | ||
| HEPES | 10mmol/L,pH7.9 | HEPES | 20mmol/L,pH7.9 |
| KCl | 10mmol/L | NaCl | 420mmol/L |
| MgCl2 | 1.5mmol/L | MgCl2 | 1.5mmol/L |
| DTT | 1mmol/L | DTT | 0.5mmol/L |
| 甘油 | 5% | 글리세린 | 25% |
| EDTA | 0.2mmol/L | EDTA | 0.2mmol/L |
| NP-40 | 1% | ||
| PMSF (사용 전에 첨가) | 1mmol/L | PMSF (이용 후 추가) | 0.5mmol/L |
| 아프로티닌 | 3mg/L | 아프로티닌 | 5mg/L |
| 레우페프틴 | 3mg/L | 레우페프틴 | 5mg/L |
| 페프스타인 | 2mg/L | 페프스타인 | 3mg/L |
단계:
1세포를 EP 튜브에 넣고 원심 분기 (4000r/min, 5min, 4도) 로 처리합니다.
2PBS로 세 번 씻고 위와 같이 원심분해하고 초상수제를 폐기합니다.
3100μl의 버퍼 A를 첨가하고 얼음 위에 10분 동안 웅크리고 원심 분기 (1000r/min, 1분) 를 후 초상태 물질을 폐기합니다.
4펠렛을 60 마이크로 리터의 버퍼 B에 다시 суспен디하고, 잘 섞고, 얼음 위에 30분 동안 원심분해, 원심분해 (14000r/min, 15min, 0°), 초상륙 물질을 수집하고 펠렛을 폐기합니다.
그 중 리제이트 A의 역할은 주로 세포질 단백질과 세포막 단백질을 분비하는 데 사용됩니다. 리제이트 B는 핵 단백질을 분비하는 데 사용됩니다. NP-40은 표면 활성제와 세정제입니다.세포막을 파괴합니다., 그리고 분비된 단백질과 결합하여 침착을 방지할 수 있습니다.그래서 세포질 단백질과 세포막 단백질의 대부분은 첫 번째 단계에서 중심분열에 의해 제거 된 후 초상성 물질을 제거 할 수 있습니다핵 단백질이 추출된 후, 2시간 동안 리세트 A로 투석되어 IP를 위해 결합될 수 있습니다.또는 다른 용액으로 희석하고 IP 또는 다른 실험을 위해 농축 된 원심분리 튜브로 대체.
데싱의 인 비트로 진단 반응제의 주요 원료는 다음과 같습니다.생물학적 버퍼 트리스, 비신, HEPES, CAPS, MOPS, TAPS, EPPS, MOPSO, PIPES, PEP; 2. 화학 발광 반응기 루미놀, 이솔루미놀, 아크리딘 에스터 DMAE-NHS, 아크리딘 에스터 NSP-DMAE-NHS, 아크리딘 소금 NSP-SA,아크리딘 소금 NSP-SA-NHS, 아크리딘 하이드라지드 NSP-SA-ADH, 아크리딘 에스테르 ME-DMAE-NHS; 3. 뉴 트린더의 반응 물질 TOOS, TOPS, ADOS, ADPS, ALPS, DAOS, HDAOS, MADB, MAOS; 4.혈액 수집 튜브 첨가물용 반방사 분리 젤, 나트륨 헤파린, 리?? 헤파린, EDTA-2K3K, EDTA-2NA, 조혈제, 응고 분말 등을 촉진합니다. 또한 바이러스 운송 매체와 카보머 940/ 980을 생산합니다.반갑습니다..
