4-하이드록시에틸피페라진 에탄수울폰산, 약칭:HEPES영어로, CAS 번호 7365-45-9입니다. 그것은 흰색 결정 분말로 나타나며 6.8-8 사이의 안정적인 pH 범위를 가지고 있습니다.2생물학적 완충제로서, pH 조절은 가장 일반적인 사용이며 피부 관리 분야에서 주요 제조업체에 의해 매우 선호됩니다.광견병 바이러스 검출에 중요한 역할은 거의 알려져 있지 않습니다., 그리고 우리는 아래에서 상세한 소개를 제공 할 것입니다.
전통적 광견병 바이러스 검출 방법 의 딜레마
광견병 바이러스가 감염된 세포에서 번식 할 때 일반적으로 세포병 효과 (CPE) 를 일으키지 않으며 일반적인 배양 조건 하에서도 플라크가 형성되기 어렵습니다.국내외의 많은 학자들이 성공적으로 치킨 배아 세포와 BHK-21 세포에 광견병 바이러스 표지판 방법을 구축했지만, 이 방법들은 명백한 단점을 가지고 있습니다. 어떤 방법은 실험 조건에 매우 엄격한 요구 사항을 가지고 있으며, 온도, 습도,가스 구성일부 작업 단계는 복잡하고 전문 기술자가 장기 교육을 받아야 능숙하게 마스터 할 수 있습니다.이러한 방법의 홍보와 적용을 크게 제한합니다..
광견병 바이러스 검출에 대한 HEPES의 획기적인 응용
연구자들은 우연히 HEPES가 감염된 세포에 대한 광견병 바이러스의 병원성 효과를 증가시킬 수 있다는 것을 발견했습니다.연구자들은 광견병 바이러스에 대한 간단하고 빠른 HEPES 표지판 에칭 방법을 혁신적으로 개발했습니다..
HEPES 는 부식 점 의 형성 을 크게 촉진 한다
실험에서 감염된 세포는 37°C에서 3-5일 동안 배양되었고, 감염된 세포의 한 그룹은 HEPES로 치료되었습니다.표면 하단에 명백한 세포 손상이 명확하게 관찰 될 수 있습니다.그 후, 결정 보라색 염색이 사용되었고, 부식 지점이 명확하게 나타났습니다.HEPES 치료를 받지 않은 감염 세포 그룹에서는 세포병 효과나 플라크 형성이 나타나지 않았습니다.이 실험 결과는 HEPES가 BHK 세포에서 광견병 바이러스의 플라크 형성에 중요한 촉진 효과를 가지고 있음을 강력하게 보여줍니다.
HEPES 에치 방식은 높은 민감도를 가지고 있습니다.
HEPES 플라크 검사는 조작이 쉬울 뿐만 아니라 바이러스 감염 타이터의 타이틀링에서도 잘 수행됩니다.실험 데이터에 따르면 바이러스 감염 후 형성된 플라크 수와 바이러스 희석 사이에 명확한 타이터 관계가 있습니다.예를 들어 광견병 바이러스 CTN-BHK 균류를 취하면 감염 타이터는 각각 HEPES 플라크 분석과 마우스 분석을 사용하여 결정되었습니다.HEPES 표지판 방법으로 측정된 표지판의 수는 1에서 1에 달하는 것으로 나타났습니다.0. 0 × 10 ° ~ 4. 0 × 10 * PFU / ml, 쥐 방법으로 측정 된 감염 타이터는 6. 0 ~ 6. 8 log 또는 1.0 × 10 ° ~ 6. 3 × 10 / ml 사이였습니다.이 결과는 빠른 HEPES 플라크 방법과 마우스 방법 사이의 민감성의 일관성을 완전히 보여줍니다..
HEPES 에치링 방법 의 탁월 한 장점
광견병 바이러스 CTN-181과 CTN-BNK 균류의 감염 타이터 타이트레이션을 연구 할 때HEPES의 사용이 감염된 세포에 대한 광견병 바이러스의 병원성 효과를 효과적으로 유발하고 증가시킬 수 있다는 것이 밝혀졌습니다.특정 작업 방법은 다음과 같습니다: 바이러스 감염 후 세포를 37 ° C에서 3-5 일 동안 재배합니다.메틸 셀룰로오스 반탄소 매체의 덮개에 50-100mmol/L HEPES를 방울로 추가합니다.24시간 후에 크리스탈 비올렛 용액으로 염색하고 방온에서 건조하여 육안으로 부식 점의 수를 직접 계산합니다.에칭 방법 에 관한 이전 문헌 보고서 와 비교, 이 방법은 속도, 단순성, 경제성, 민감성 및 마스터의 편리성과 같은 많은 장점을 가지고 있습니다.
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