트리스 (트라이하이드록시메틸라미노메탄) 는 25°C의 방온에서 8.1의 pKa와 pH 7.0 ~ 9의 효과적인 버퍼 범위의 약한 염기입니다.2트리스 알칼리의 수분 용액의 pH는 약 10입니다.5일반적으로 염화수소는 pH 값을 원하는 값에 조정하기 위해 추가되어 pH 값의 버퍼가 얻을 수 있습니다.DNA는 그러한 용액에서 분해됩니다., 따라서 용해성을 향상시킵니다. pH 조절된 산 용액을 아세트산으로 대체하면 "TAE 버퍼" (Tris/Acetate/EDTA) 를 얻을 수 있습니다.한편 'TBE 버퍼' (Tris/Borate/EDTA) 는 보릭산으로 대체하여 얻습니다.이 두 개의 버퍼는 일반적으로 핵산 전소분석 실험에서 사용됩니다. Tris에 의해 준비된 TAE, TBE 등은 DNA 전소분석에 가장 일반적으로 사용되는 반응제이며 TE (pH 8.0) 는 주로 DNA를 녹이는 데 사용됩니다.. (TE는 Tris와 EDTA의 조합입니다.) 1MTris-HCl6.8 및 1.5MTris-HCl8.8는 SDS-PAGE에 가장 일반적으로 사용되는 반응제입니다.
TRIS 반응제
유전자 공학의 전통적인 작업 중 아가로스 젤 전해질은 가장 널리 사용됩니다. 아가로스 젤 전해질은DNA 조각을 식별하고 정화 하는 것일반적으로 수평 전소분해 장치를 사용하여 일정한 강도와 방향의 전기장 아래에서 전소분해합니다.DNA 분자는 젤 버퍼 (일반적으로 알칼리) 에서 음전하를 받고 전기장 안에서 음전하에서 양전하로 이동한다DNA 분자의 이동 속도는 분자의 크기와 형태에 달려 있습니다. 전기장 강도와 방향, 염기 성분, 온도 및 내장 염료의 영향,등등.
운영프로세스:
1 TE 버퍼: (10 mmol/L Tris-HCl, 1 mmol/L EDTA)
전극분석 버퍼 (50XTAE)
2 전전도 분해 버퍼 (50XTAE): Tris 242g, 빙하 아세트산 57. 1ml, EDTA (0. 5mol/ L pH 8. 0) 100ml
사용 시 증류된 물로 50번 희석합니다.
3 샘플 버퍼 (6X): 0.25% 브로모페놀 블루, 0.25% 질렌 블루, 40% (W/V) 사카로스
4 STET 버퍼 (pH 8.0) (8% 사카로스, 0.5% 트리톤, 50 mmol/L EDTA, 10 mmol/L Tris)
1) 100 ml의 TAE 전자기분해 용액을 측정하고 0.7 g의 아가로스를 첨가하고 잘 섞어 마이크로 웨브 오븐에 넣고 3분 동안 가열하고 아가로스를 완전히 녹여줍니다.
2) 깨끗하고 건조한 전극화판을 살균 된 고무로 닫고 가장자리를 소량의 아가로스 용액으로 봉인합니다.빗을 배치하고 빗의 하단 가장자리와 전자기 판 사이의 거리를 조정일반적으로 1-2mm가 적합합니다.
3) 용해된 아가로스 용액이 약 50C까지 냉각되면 5 ML의 에티디움 브로마이드를 첨가하고, 에티디움 브로마이드의 최종 농도는 1.0 m g/m L입니다. 혼합 후,아가로스 용액을 전자기 접시에 뿌리고 움직이지 않고 가만히 유지하십시오..
4) 젤이 완전히 굳은 후 (실온에서 30~45분), 가볍게 빗을 벗고 테이프를 벗고 젤을 전자기 패드에 넣는다.
5) 전소분해 과정에서 전소분해 용액 (1'TAE) 을 첨가하여 약 1-2mm의 전소분해 용액으로 아가로스 젤 표면을 덮었습니다.
