HEPES생화학 산업에서 중요한 생화학제품이다. 생물학적 연구 분야에서 중요한 완충제 중 하나로 간주된다. HEPES의 화학 이름은:N-하이드록시에틸피페라진-1-에탄수르폰산, 그 성격은 흰색 결정 분말입니다. 그것은 약한 산소이며, 종종 유기 화학 산업에서 zwitterionic 버퍼 및 의약품 중간 물질로 사용됩니다.그것은 종종 그것의 장점 때문에 세포 배양의 버퍼로 선택됩니다.:
데싱의 위치와 버퍼 제품
1HEPES의 분해 능력은 온도 증가와 함께 향상되고 온도 감소와 함께 약화 될 수 있지만 다른 버퍼에 비해분해 상수는 온도에 따라 크게 변하지 않습니다., 그래서HEPES 버퍼효소의 구조와 기능을 더 잘 유지하는 버퍼가 됩니다. 버퍼는 더 긴 시간 동안 일정한 pH 범위를 조절할 수 있고 세포에 독성 효과가 없습니다.
2대부분의 세포에 필요한 pH는 7.2-7.4, HEPES는 이 범위에서 좋은 완충 능력을 가지고 있지만 최적의 pH 값은 배양된 세포 유형에 따라 다릅니다. 섬유세포들은 더 높은 pH (7.4-7.7) 를 선호합니다.자생 세포 라인에는 산성 pH가 필요합니다.대부분의 배양 매체는 나트륨 바이카보네트 (NaHCO3) 와 CO2 시스템을 사용하여 버퍼링합니다.가스 단계의 CO2 농도는 배양 매체의 나트륨 바이카보네트 농도와 균형을 잡아야 합니다.이 경우, 세포 배양 병 뚜?? 은 가스 교환을 보장하기 위해 너무 단단하게 skrued되지 않아야합니다.
그러나 일정 기간 동안 저장된 후, 펌퍼 시스템의 pH는 CO2의 휘발성과 함께 증가합니다.세포가 하위 배양되고 불 때 문화 용액은 빠르게 보라색이됩니다이 문화 매개체로 배양된 세포는 생존이 어렵게 됩니다. 생존할 경우에도 그 활동은 매우 낮고 증식 속도는 매우 느립니다.HEPES를 배양 솔루션에 추가하면 이 문제를 피할 수 있습니다.. HEPES는 고 농도의 CO2 배양 환경의 제한을 제거하기 위해 바이카보네이트를 대체하는 버퍼로 사용될 수 있습니다. 일반적으로 사용되는 HEPES 버퍼의 최종 농도는 10-25mM입니다..
HEPES를 사용하는 방법:
1HEPES는 준비된 배양 용액에 필요한 농도로 직접 첨가되고 필터레이션으로 살균 될 수 있습니다. 배양 용액 1000ml 당 2.38g의 HEPES를 첨가합니다.pH를 7로 조절합니다..2 용해 후 lN NaOH로 필터링하고 살균하고 사용합니다. 이 때 HEPES의 사용 농도는 10 mmol/L입니다.
2또한 100 x 저장 용액 (l mol/L) 으로 준비 할 수 있습니다. 사용 전에 99ml의 배양 용액이 lml 저장 용액에 추가되며 최종 응용 농도는 여전히 10mmol/L입니다.1mol/L (100 x) HEPES 주식 용액 준비 방법: HEPES 23. 8g를 90ml의 이중 증류 물에 녹여서 1N NaOH로 pH를 7. 5- 8. 0으로 조정하고, 물로 100ml로 희석하고, 필터링하고, 살균하고, 투여 병 (2ml/ 병), 4°C 또는 - 20°C에서 보관합니다.
Desheng Biochemical는 세포 배양을 위한 버퍼로 사용되면3시간 이상 가시광선에 노출된 배양매체에서 HEPES는 세포에 독성이 있는 수소 과산소를 생성합니다.문화 매체는 어두운 곳에 보관하는 것이 좋습니다.
