HEPES는 생화확적인 기업에 있는 중요한 생화확적인 준비입니다. 생물학 연구의 분야에 있는 중요한 완충기의 한 것 여겨집니다. HEPES의 화학 이름은: N-hydroxyethylpiperazine-1-ethanesulfonic 산은, 특성 백색 크리스탈 분말이고, 유기 화학 공업에 있는 zwitterionic 완충기 그리고 약제 중간물로 약한 산, 자주 사용합니다. 그것은 그것의 이점 때문에 세포 배양을 완충기로 수시로 선정됩니다:
Desheng의 위치와 완충기 제품
1. HEPES의 분해 수용량은 온도의 증가로 강화되고 온도의 감소로 약해질 수 있습니다, 그러나 다른 완충기와 비교해, 그것의 분해 불변의 것은 HEPES를 완충기를 더 나은 효소의 구조 그리고 기능을 유지하는 A 완충기가 되 온도에 다량을 바꾸지 않습니다. 완충기에는 더 긴 기간을 위한 일정한 PH 범위를 통제할 수 있지 않으며 세포에 대한 중독 작용이 있습니다.
2. 대부분의 세포를 위해 요구된 PH는 7.2-7.4입니다, HEPES에는 이 범위에 있는 좋은 완충능이 있습니다, 그러나 최선 PH 값은 경작된 세포의 유형으로 변화합니다. 섬유아세포는 2차 배양하는 세포 선은 신랄한 PH (7.0-7.4)를 요구하는 그러나, 더 높은 PH (7.4-7.7)를 선호합니다. 최대 배양기는 중탄산 나트륨 (NaHCO3)와 부드럽게 하기를 위한 이산화탄소 체계를 의지합니다. 가스 단계에 있는 이산화탄소 농도는 배양기에 있는 중탄산 나트륨 농도도 균형을 잡아야 합니다. 이 경우에, 세포 배양 병 마개는 가스 교환을 지키기 에는 너무 단단히 조여지면 안됩니다. 그러나, 특정 기간 동안 저장 후에, 완충기 체계의 PH는 이산화탄소 휘발로 증가할 것입니다. 현재로서는, 문화 해결책은 빨리 이 배양기로 경작된 세포를 살아나게 어려운 시키는 세포가 2차 배양되고 불어질 때 자주색에 됩니다. 비록 그것은 살아나더라도, 활동 또한 아주 낮, 확산 비율은 아주 느립니다. 문화 해결책에 HEPES를 추가하는 것은 이 문제를 피할 수 있습니다. HEPES는 완충기로 높 농도 이산화탄소 문화 환경의 제한을 삭제하기 위하여 중탄산염을 대체하도록 이용될 수 있습니다. 사용된 HEPES 완충기의 마지막 농도는 일반적으로 10-25mM입니다.
HEPES를 사용하는 방법:
1. HEPES는 필수 농도에 준비한 문화 해결책에 직접 추가되고, 여과에 의해 그 후에 살균될 수 있습니다. 문화 해결책의 1000ml 당 HEPES의 2.38 그램을 추가하고, lN NaOH에 7.2에 해체 후에 PH를 맞추고, 거르고 살균하거든 현재로서는 사용은, HEPES의 사용 농도 10 mmol/L입니다.
2. 그것은 또한 100개의 x 저장 해결책 (l mol/L)로 준비될 수 있습니다. 사용의 앞에, 문화 해결책의 99ml는 lml 저장 해결책에 추가되고, 마지막 신청 농도는 지금도 10mmol/L. l mol/L (100 x) HEPES 모액 준비 방법입니다: 23.8g HEPES를 90ml에 의하여 두 배 증류된 물에 있는 녹이고, 1N NaOH에 7.5-8.0에 PH를 맞추고, 그 후에 100ml에 물, 여과기로 묽게 하고 살균하고, 4℃에 작은 유리병 (2ml/bottle), 상점 또는 -20℃를 분배하십시오.
, 세포에 유독한 과산화 수소가 HEPES에 의하여 3h 보다는 더 많은 것을 위해 가시 광선에 드러낸 배양기에 있는 세포 배양을 위해 완충기로 사용될 경우 생성할 것이라는 점을 생각나게 하는 Desheng 생화확. 배양기가 암흑에서 저장된다는 것을 추천됩니다.
