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러닝 버퍼 타에와 TBE와 비교하기

2020-09-18
러닝 버퍼 타에와 TBE와 비교하기

DNA 전기영동을 수행할 때 우리는 항상 완충 용액을 추가합니다. 일반적으로 사용된 완충 용액은 트리스, 초산염과 EDTA를 포함하는 타에와 TBE (트리스-붕산염 edta)를 포함합니다.

 

버퍼의 역할이 무엇입니까? 버퍼의 기능 중 하나는 솔루션 스테이블의 pH 유지하는 것입니다. 전류가 물을 통과할 때, 산화 반응은 산소와 수소이온을 발생시키기 위해 음극에서 발생합니다 ; 환원 반응은 수소와 수산화 이온을 발생시키기 위해 음극에서 발생합니다. 장기 전기영동은 음극 산과 음극 알칼리성을 만들 것입니다. 좋은 버퍼 시스템은 근본적으로 양쪽 막대기에 있는 해결책의 pH 안정을 유지하기 위한 강한 완충능을 가져야 합니다. 전기 이동 버퍼의 또 다른 기능은 솔루션이 DNA 분자의 이동을 용이하게 하기 위한 어떤 전도성을 가지고 있게 하는 것입니다. DNA는 부정적으로 (버퍼 pH=8) 전기영동 동안 고발되고, 양전극에 음극으로부터 이동하는 알칼리성 물질입니다.

 

전기 이동 버퍼의 또 다른 성분은 EDTA이며, 그것의 목적이 전기영동 동안 Mg2+ 플라스마를 킬레이팅하고 DN 분해 효소의 활성화를 방지하는 것 입니다. 뉴클레아제가 이러한 이온을 필요로 하기 때문에, EDTA는 굳게 핵산 퇴보를 피하기 위한 이러한 이온을 잡을 수 있습니다. 그러나 마그네슘 이온이 또한 제한 엔자임, DNA 중합효소, 기타 등등과 같은 많은 효소의 공동인자이고 따라서 EDTA의 농도가 일반적으로 너무 높지 않다는 것이 (보통 약 1mM) 주목되어야 합니다.

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데성 트리스 완충액 패키징

그래서 더 좋, 타에 또는 TBE는 어느 것입니까? 실제로, 내가 DNA 전기영동을 위해 어느 것을 사용하여야 합니까? 그것은 정말로 당신의 실험의 목적에 의존합니다. 그 둘 사이의 차이를 보도록 합시다.

1. TBE의 전도성은 타에의 그것보다 큽니다. 그러므로, 타에와 비교해서, TBE는 더 덜 전기영동조에서 과열을 야기시킬 가능성이 많습니다. TBE는 장기 전기영동에 대하여 권고됩니다.

 

2. 붕산은 효소 억제제이며 만약 당신이 온침 반응을 위해 전기영동 DNA를 분리할 필요가 있다면, 그것이 타에를 전기 영동 완충액으로 이용한다고 추천받습니다

 

3. TBE는 더 작은 부분을 분리해서 더 낫습니다. 300 베이시스 포인트보다 작은 부분을 위해, TBE의 이동주 속도는 더 빨리 2% 아가로스 겔에 있습니다.

 

4. 타에는 큰 조각의 분리에 적합합니다. 2kb보다 큰 부분은 (0.8% 아가로스 겔에서) 타에서 더 빨리 이주하고 속도가 TBE에서 보다 더 빠른 10%에 대한 것입니다. 타에는 더 dna 단편의 복구에 적합합니다. TBE와 비교해서, 타에는 초나선 DNA를 위한 더 높은 결의안을 가지고 있습니다.

 

개요에서, TBE 또는 타에가 더 좋은지에 대한 질문은 일반화될 수 없습니다. 가장 적당한 버퍼 시스템은 특별한 실험적 목적에 따라 선택되어야 합니다. 데성에 의해 개발된 생물학적 버퍼는 넓은 버퍼 범위를 가지고 단지 이런 종류의 버퍼가 사용됩니다. 시스템은 다양한 pH 값과 버퍼로 준비할 수 있고, 패키징의 다양한 상술을 제공할 수 있습니다. 구입은 상의하고 구입하도록 환영받은 생화학적인 데성에 버퍼링합니다.